色譜作為種分離方法,現在已經成為分析化學學科中的個重要的分支。科學技術的發展,使得色譜技術也得到進步的發展,不斷有新的聯用的技術得到應用。生物醫學的發展,也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對研究的對象進行定性和定量的研究。 色譜柱的相關性質
色譜柱的維護與保養 1.色譜柱的維護。在使用中,應時常對色譜柱進行測試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現象,造成這種現象的主要原因是:①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進樣器等中的不溶物④柱內不溶物的形成等。如果當色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進行修復。試劑)應用溶解性強的溶劑(如水)進行沖洗。先:使用含鹽緩沖液后(如離子對其次:先斷開檢測器,然后用對來自樣品中的物質有強溶解性的溶劑進行沖洗,對于反相色譜柱,可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等,在此條件下,應避免溶劑的pH低于2或高于8。后:如果經過上述還是沒有修復,色譜柱壓力還是沒有下降,則要斷開檢測器,將色譜柱反方向放置,然后檢查柱壓,若壓力穩定下降,則保持色譜柱反方向連接,用低于0.5ml/min流速沖洗小時。如果壓力不下降,則要看內置過濾器是否被堵塞,如果被堵塞應沖洗或更換,若端的填料發生堵塞,柱子將不可能被徹底恢復,只能通過去掉端的部分填料,重新填充進行有限的柱效恢復。而且修復的厚度是2-5mm。
2.色譜柱的保養。色譜柱在使用前,好進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。我們要根據不同的情況對色譜柱進行保養:①反相色譜柱每天實驗后的保養:使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷 ②長期保存色譜柱:如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買新色譜
3.色譜柱的維護與保養在高壓液相色譜中的應用 不同的色譜柱清洗方法各不相同比如: 3.1反相柱分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC),異丙醇(HPLC),二氯甲烷(HPLC)等溶劑作為流動相,依次沖洗,每種流動相流經色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。 3.2正相柱分別用正己烷(HPLC),異丙醇(HPLC),二氯甲烷(HPLC),甲醇(HPLC)等溶劑做流動相,順次沖洗,每種流動相流經色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動相必須嚴格脫水。 3.3離子交換柱長時間在緩沖溶液中使用和進樣,將導致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。 另外,還可以選擇能溶解柱內污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調回來,但可能會造成柱內擔體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。